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多肽的溶解與保存

多肽有著很多特性,關于一些特殊肽您需要的有關信息可與博奧森公司的技術人員聯系。當然首先建議您用少量肽來試驗最適合的溶解方法,當多肽完全溶解后,才能加緩沖液(注意:應將多肽加入到適當溶劑中攪拌)。

一、凍干多肽的溶解

1、多肽溶解的主要問題是二級結構的形成。雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除最短的肽鏈外,此現象產生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。所以,溶解多肽的第一個原則是使用無菌蒸餾水或去離子水,當然無氧水最好。多肽溶液可能遇到細菌降解,為防止此情況的發生,應溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,應溶于無氧的水中,無氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到;

2、若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發熱或多肽降解;

3、若多肽含有多個堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:對于疏水性強的多肽,應使用50%的乙酸;

4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調整;

5、異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有機溶劑的量必須很少否則將嚴重影響停留時間;

6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香鏈而高度疏水、或為中性肽時,DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有利于多肽的溶解:

a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶;

b.膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾;

c.DMF是最佳變性劑(最高濃度可達30%),滴加至多肽溶解;

d.反相層析法時,DMF將與洗脫液前鋒一起流出,根據入量的多少,峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF流出后幾分鐘內流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將很低。

二、凍干多肽的保存

標有“凍干保存”說明的多肽應該保存在冰凍條件下,以-20℃以下最佳,其活性可保持多年。當使用干凍產品時,開蓋前其容器應在裝有新鮮干燥箱內升至室溫。-20℃的產品,此過程需要一小時或更長,隨保裝而定。否則,當容器打開,水氣進入導致凝縮而降低穩定性。一旦打開,應迅速稱量完畢,立即封閉以免潮解,親水肽更應注意。

三、溶解多肽的保存

多肽溶液比干粉的穩定性差很多,為了獲得較好的效果,遵循以下原則:

1、分成小包裝避免反復凍融。使用多少解凍多少;

2、溶于pH5-7無菌的緩沖液中,-20℃儲存;

3、由于細菌能降解多肽,儲存前應過濾細菌;

4、包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此應保存在無氧化劑的環境中。

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